EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品簡介:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑是一款體內(nèi)專用型基因轉(zhuǎn)染試劑，可通過肌肉注射的方式將mRNA遞送傳送至體內(nèi)并在注射部位高效表達目的蛋白。與其它mRNA專用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑相比，具有操作簡便、體內(nèi)毒性低、穩(wěn)定性好、體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率及蛋白表達量高等優(yōu)點。

應用范圍:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑可被應用于mRNA疫苗研發(fā)或基因治療等相關工作的研究中?？捎糜谶f送熒光標記的mRNA或具有特殊功能的mRNA，并在體內(nèi)高效表達。可滿足基礎科研、初期工藝開發(fā)及臨床前實驗研究使用。

保存條件: 

2-8℃保存一年

運輸：

常溫運輸

體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法:

以體重20g小鼠，mRNA注射10μg為例，參考表1調(diào)整，步驟如下：

體內(nèi)轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化:

可通過改變mRNA的用量和濃度以及EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑濃度對體內(nèi)分布或蛋白表達情況進行優(yōu)化。EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): mRNA (μg)可以在4:1和2:1之間調(diào)整。根據(jù)鼠體重的不同，葡萄糖注射液的補加體積可以在推薦量±30μL之間調(diào)節(jié)。優(yōu)化方法參考表2。使用熒光標記mRNA的活體分布實驗，建議在注射后4-6小時開始檢測，熒光素酶標記mRNA的活體分布實驗，建議在注射后6小時開始檢測。

表1.  不同體重鼠的體內(nèi)用量推薦

表2.  體重20g鼠的優(yōu)化復合方式推薦

一：轉(zhuǎn)染效率低

影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先，與所轉(zhuǎn)染細胞有關，有的細胞容易轉(zhuǎn)染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細胞不易轉(zhuǎn)染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關，在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后，沒有使用最適宜的細胞密度，應根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細胞密度進行細胞接種，更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。

二：轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個因素緊密相關，一個是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，則不建議反復凍融，會引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化。基因如短時間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細胞毒性大

導致轉(zhuǎn)染時細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時細胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進行操作，以避免細胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復合物

沒有生成高效復合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時應考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉(zhuǎn)染試劑對血清的影響很大，應在無血清情況下進行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly?  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對轉(zhuǎn)染體系的影響，可在含血清培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染。

五：使用錯誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑，都應嚴格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進行操作，其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時間、檢測時間等重要因素。

六：轉(zhuǎn)染試劑有時呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應立即聯(lián)系客服人員?；蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲存溫度太低，請務必按照試劑說明書要求的溫度進行儲存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉(zhuǎn)染復合物出現(xiàn)沉淀

當轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復合物的孵育體系體積小于說明書建議時，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會導致體系中的復合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴格參考說明書的用量進行轉(zhuǎn)染。

八：siRNA轉(zhuǎn)染時，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細胞是否為難轉(zhuǎn)染細胞？以及是否按照說明書建議的用量進行了操作等。首先應該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑，確保細胞密度在60-70%之間，并嚴格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時，基因沉默效率不夠高

當細胞同時轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時，建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進行復合，再將兩個復合物體系分兩次分別加入到同一個裝有細胞的實驗孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機理不相同，如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時轉(zhuǎn)染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。