EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝規(guī)格 |
NBS6326-0.5ml | EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml |
NBS6326-1ml | EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑 | 1ml |
NBS6326-5ml | EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑 | 5x1ml |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑是一款性能優(yōu)良的DNA轉(zhuǎn)染試劑，可用于質(zhì)粒DNA的傳送。它具有較強(qiáng)的DNA轉(zhuǎn)染能力，與其它轉(zhuǎn)染試劑相比，具有不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性 好等優(yōu)點(diǎn)。
應(yīng)用范圍:
EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多易轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的DNA轉(zhuǎn)染、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。適用于多種貼壁細(xì)胞系，特別適用于各種常規(guī)細(xì)胞如HeLa、293T、COS7、CHO和B16F10等，均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率，且重復(fù)性好。
保存條件:
2-8℃保存一年
運(yùn)輸：
常溫運(yùn)輸
質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染:
以24孔板為例，請(qǐng)參考表1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，步驟如下:
1 | 細(xì)胞接種: 每孔接種0.5~1.0×105個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)12~24小時(shí)，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)到60~70%融合度 |
2 | 質(zhì)粒稀釋: 將0.5 μg質(zhì)粒稀釋于Opti-MEM培養(yǎng)基中，終體積10 μL |
3 | 轉(zhuǎn)染試劑稀釋: 取1μL的EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑加入到9μL的 Opti-MEM培養(yǎng)基中，稀釋后的終體積為10μL |
4 | 復(fù)合物制備: 復(fù)合物制備：將上述質(zhì)粒DNA稀釋液和轉(zhuǎn)染試劑稀釋液混合，輕輕吹打均勻后，室溫靜置10分鐘 |
5 | 將上述20μL復(fù)合物加入到24孔板中，輕輕吹打混勻，繼續(xù)培養(yǎng)18~48小時(shí)后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，無(wú)需更換培養(yǎng)基 |
質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染優(yōu)化:
可通過(guò)改變細(xì)胞密度、DNA濃度以及EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。保證細(xì)胞融合度在60%以上，EZ poly?DNA轉(zhuǎn)染試劑(μL):DNA (μg)可以在1:1和5:1之間調(diào)整
表1. 不同培養(yǎng)板所需轉(zhuǎn)染試劑和DNA的用量
培養(yǎng)板 | 單孔面積 | 接種 培養(yǎng)基 | Opti-MEM 稀釋后終體積 | DNA轉(zhuǎn)染 |
試劑用量 | DNA |
96孔板 | 0.3cm2 | 200μL | 10μL | 0.4μL | 0.2μg |
24孔板 | 2.0cm2 | 500μL | 20μL | 1.0μL | 0.5μg |
12孔板 | 4.0cm2 | 1mL | 40μL | 2.0μL | 1.0μg |
6孔板 | 10.0cm2 | 2mL | 100μL | 4.0μL | 2.0μg |
60mm | 20.0cm2 | 5mL | 0.2mL | 8.0μL | 4.0μg |
100mm | 60.0cm2 | 15mL | 0.6mL | 24.0μL | 12.0μg |
一：轉(zhuǎn)染效率低
影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先，與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān)，有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān)，在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后，沒(méi)有使用最適宜的細(xì)胞密度，應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說(shuō)明書(shū)中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種，更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。
二：轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)
轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類(lèi)的轉(zhuǎn)染試劑，則不建議反復(fù)凍融，會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化?；蛉缍虝r(shí)間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過(guò)10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。
三：細(xì)胞毒性大
導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過(guò)大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過(guò)大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，以避免細(xì)胞毒性大的問(wèn)題。
四：沒(méi)有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物
沒(méi)有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先，可能是沒(méi)有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類(lèi)及分子量等因素。其次，有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大，應(yīng)在無(wú)血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly? 系列轉(zhuǎn)染試劑無(wú)需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響，可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
五：使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟
無(wú)論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑，都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。
六：轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁
如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員?；蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低，請(qǐng)務(wù)必按照試劑說(shuō)明書(shū)要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。
七：轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀
當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說(shuō)明書(shū)用量，或復(fù)合物的孵育體系體積小于說(shuō)明書(shū)建議時(shí)，由于體系中過(guò)量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說(shuō)明書(shū)的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
八：siRNA轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高
影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞？以及是否按照說(shuō)明書(shū)建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑，確保細(xì)胞密度在60-70%之間，并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)建議的用量去使用操作。
九：DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高
當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí)，建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合，再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同，如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。
