DiI (DiIC18(3))細胞膜橙紅色熒光探針

產品描述

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類長鏈的親脂性二烷基碳菁類染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標記細胞膜以及其他脂溶性生物結構。作為一類環(huán)境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質，雖然在水中其熒光強度很弱）結合時，其熒光強度顯著增強。一旦進入細胞后，它們在細胞內質膜中逐步擴散，于最佳濃度條件下可將整個細胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結合使用。其中，DiI及其衍生物由于極其低的細胞毒性，應用最為廣泛。不僅普遍用于活體和固定組織及細胞的神經元逆行性和順行性示蹤分析，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程的細胞遷移，通過FRAP（熒光光漂白恢復技術）檢測脂質在細胞膜上的擴散過程，檢測細胞毒性，以及標記脂蛋白如LDL和HDL等。

DiI (DiIC18(3)) 是一種親脂性膜染料，通常用作神經元和其它細胞的長期示蹤劑。DiI 在進入細胞膜之前熒光非常弱，僅當進入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的橙紅色熒光 (λex=549 nm，λem=565 nm)。

DiI基本特性：

1)      別名：DiI perchlorate; DiIC18(3)

2)      CAS NO：41085-99-8

3)      分子式：C59H97ClN2O4

4)      分子量：933.87 g/mol

5)      純度：≥99%（TLC）

6)      溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

7)      外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末

8)      Ex/Em：549/565 nm（in phosphate buffer/SDS pH 7.0）

9)      推薦濾光器：Omega- XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

保存與運輸方法

保存：粉末：-20oC避光保存，有效期3年；

          溶劑中：-80°C避光保存，有效期1年。

運輸：冰袋運輸。

溶液配制表

DMSO

使用方法

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據具體的實驗條件做出調整。

1.染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87 g/mol）溶于1.07ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液?！咀⒁狻?未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5μM的工作濃度?！咀⒁狻抗ぷ饕鹤罱K濃度需要根據不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進行最優(yōu)濃度的摸索。

2.懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3.貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。

4、顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見下表：

2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5、流式細胞儀檢測

經DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。