CoroNa Green, AM, Cell Permeant 鈉離子指示探針

【溫馨提示】：見我司整理的鈉離子載體/探針（Sodium ionophores/indicators）產(chǎn)品專題。

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養(yǎng)級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。

產(chǎn)品簡介：

CoroNa Green, AM是一種具細胞膜滲透性的鈉離子（Na+）指示探針。一旦進入細胞后，經(jīng)非特異性酯酶水解生成不具有膜滲透性的CoroNa Green，一旦與Na+結(jié)合，綠色熒光明顯增強，但波長發(fā)生很少變化。與其他Na+指示探針SBFI（貨號：NBS7676）和ENG-2（貨號：NBS7677、貨號：NBS7678）一樣，當(dāng)存在生理濃度的其他單價陽離子時，CoroNa Green允許從時間和空間上來選擇性分辨Na+濃度的變化。分子量更小的CoroNa Green（586），相比較于其他大分子量的Na+指示探針ENG-2（1087），在同等條件下，其膜滲透性的衍生物能更好的加載進入胞內(nèi)。CoroNa Green能響應(yīng)更廣泛的Na+濃度范圍（見附圖II），Kd~80mM。不同于傳統(tǒng)的SBFI，與Na+結(jié)合后的CoroNa Green的最大吸收和發(fā)射波長分別是492nm和516nm，因此，兼容于任何能檢測熒光素（Fluorescein）的儀器，包括：流式細胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀和熒光光度計。CoroNa Green是一款有價值的工具，用來分析細胞外和細胞內(nèi)的鈉離子水平。

產(chǎn)品特征：

1） 同義名：CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester

2） 分子量：657.62 g/mol

3） 純度：≥90%（HPLC）

4） 外觀：固體

5） 最大吸收/發(fā)射波長：492/516nm

6） 解離常數(shù)（Kd）：~80mM

7） 溶解性：DMSO

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

產(chǎn)品使用：（活細胞成像分析）

以下步驟僅做參考，具體請根據(jù)實際情況或參考文獻資料來調(diào)整。

1.1 儲存液準(zhǔn)備：于實驗前，將低溫保存的CoroNa Green AM從冰箱取出平衡至室溫（至少20min），低速離心后再開蓋，直接往管內(nèi)加入高質(zhì)量的無水DMSO配制成1-10mM儲存液，比如：往50μg CoroNa Green, AM固體（Mw：657.62）加入15μl DMSO，充分溶解后配制成5mM儲存液。≤-20oC分裝干燥凍存，避免反復(fù)凍融。

1.2 工作液準(zhǔn)備：于實驗前，用生理緩沖液比如：HHBS、HBSS或無血清培養(yǎng)基稀釋一定量的儲存液，使其工作濃度在0.5-10μM，初次使用務(wù)必摸索幾個梯度濃度的探針，以確認(rèn)適宜的工作濃度。工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 染色步驟：

1.4 熒光檢測：

注意事項：

1.       整個染色過程中需注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

應(yīng)用示例（來自文獻，僅做參考）

1）文獻來源：Fujishima A, Takahashi K, Goto M, Hirakawa T, Iwasawa T, Togashi K, Maeda E, Shirasawa H, Miura H, Sato W, Kumazawa Y, Terada Y. Live visualisation of electrolytes during mouse embryonic development using electrolyte indicators. PLoS One. 2021 Jan 29;16(1):e0246337. doi: 10.1371/journal.pone.0246337. PMID: 33513193; PMCID: PMC7845971.

實驗?zāi)康模?span>Na+imaging）：胚胎（從桑椹胚至孵化期）用0.5μM CoroNa Green AM加載，37℃孵育30min。之后，用LSM 780共聚焦顯微鏡來測定胞內(nèi)和/或囊胚腔的熒光強度。激發(fā)和發(fā)射波長分別是488nm和510-520nm，相同實驗至少重復(fù)3次。

2）文獻來源：Fu T, Xu C, Li H, Wu X, Tang M, Xiao B, Lv R, Zhang Z, Gao X, Liu B and Yang C (2022) Salinity Tolerance in a Synthetic Allotetraploid Wheat (SlSlAA) Is Similar to Its Higher Tolerant Parent Aegilops longissima (SlSl) and Linked to Flavonoids Metabolism. Front. Plant Sci. 13:835498. doi: 10.3389/fpls.2022.835498

實驗?zāi)康模∟a+imaging）：小麥種子水培10天后，暴露于150mM NaCl溶液7天。之后加入CoroNa Green AM來觀察小麥根部細胞內(nèi)的Na+分布。小麥根部用含探針的染色工作液（20 μM CoroNa Green AM, 5 mM KCl, 5 mM Ca2+-MES, pH 6.1）避光孵育1h。用蒸餾水清洗染色部位。使用共聚焦成像儀（激發(fā)：488nm，發(fā)射：505-525nm）來觀察根部的分生組織區(qū)和成熟區(qū)。

Fig. Effects of salinity stress on Na+ and K+ homeostasis in a synthetic tetraploid wheat line and its diploid parents. (A,B) Na+ distribution in root cell indicated by CoroNa Green AM under salinity stress. (C–F) Na+ and K+ concentration. The seedlings were exposed to 150 mM NaCl for 7 days. The values are the mean (± SD) of three biological replicates. Different letters above the bar showed significant differences among wheat lines and treatments according to t-test (P < 0.05).

3）文獻來源：Bortner, C.D., Oakley, R.H. & Cidlowski, J.A. Overcoming apoptotic resistance afforded by Bcl-2 in lymphoid tumor cells: a critical role for dexamethasone. Cell Death Discov. 8, 494 (2022).

實驗?zāi)康模?span>Determination of intracellular potassium, sodium, and calcium）：于檢測前1h，取 2?ul 的2.5?mM CoroNa Green-AM (Na+) or PBFI-AM (K+) 儲存液加入1ml細胞溶液中，使其終濃度為5?uM。于檢測前30min，取4?ul的1mM Fluo-4加入1ml細胞溶液中。于37?°C, 7% CO₂ 中孵育細胞. 于流式分析前再加入PI使其工作濃度為10?ug/ml. 用裝有FACSDiVa 軟件的LSRII流式細胞儀進行數(shù)據(jù)分析。僅將碘化丙啶染色陰性的細胞進行相對的胞內(nèi)離子濃度分析。

參考文獻

[1] Naumann G, Lippmann K, Eilers J. Photophysical properties of Na+ -indicator dyes suitable for quantitative two-photon fluorescence-lifetime measurements. J Microsc. 2018 Nov;272(2):136-144. doi: 10.1111/jmi.12754. Epub 2018 Sep 7. PMID: 30191999.

[2] Sediqi H, Wray A, Jones C, Jones M (2018) Application of Spectral Phasor analysis to sodium microenvironments in myoblast progenitor cells. PLoS ONE 13(10): e0204611. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0204611

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