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intronbio 脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit（17141 ）

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intronbio 脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit（17141 ）

脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit
貨號(hào)：17141
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品牌：intronbio
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17141

脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide（LPS）Extraction Kit

貨號(hào)：17141 

規(guī)格：100次

品牌：intronbio 

試劑盒組成

組分

名稱

規(guī)格

保存方法

1

Lysis Buffer

1x 100 ml

2~8℃

2

Purification Buffer

1x 80ml

2~8℃

LPS背景描述：

 ◆ 脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分，結(jié)構(gòu)很復(fù)雜、熱穩(wěn)定性*（在250℃下干熱滅菌2h才*滅活）。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因，如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素（endotoxin）。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成，不同細(xì)菌間的多糖鏈?zhǔn)歉叨茸兓?，決定細(xì)菌的血清型；而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動(dòng)，包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過(guò)檢測(cè)LPS的存在來(lái)診斷腦膜炎。

◆ 正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系，生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究，如闡明LPS的結(jié)構(gòu)，代謝，免疫學(xué)，生理學(xué)，毒性，生物合成途徑；誘導(dǎo)生長(zhǎng)促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌；誘導(dǎo)疾病研究的動(dòng)物模型如炎癥反應(yīng)，急性肺損傷，

產(chǎn)品描述：

◆ 常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的熱酚-水法（hot phenol-water method），主要優(yōu)勢(shì)在于高產(chǎn)量，但是提取步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)，以及常受蛋白質(zhì)和核酸的污染，純度低等缺點(diǎn)也常困擾科研工作者。

◆ iNtRON提供的LPS提取試劑盒是市場(chǎng)上的個(gè)商品化的產(chǎn)品，排除傳統(tǒng)熱酚-水法的缺陷，使得科研工作者能夠快速方便的從細(xì)菌中提取LPS。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

∷ 適用性廣，能從所有G-菌中提取LPS（見Fig. 2）；

∷ 操作時(shí)間短（包括裂解在內(nèi)，60min內(nèi)即可完成）；操作簡(jiǎn)單方便；

∷ 少量細(xì)菌即可獲得足夠的LPS；LPS產(chǎn)量與細(xì)菌培養(yǎng)物成正比，一般使用3~5ml培養(yǎng)物L(fēng)PS產(chǎn)量高；細(xì)菌適合培養(yǎng)體積1~2ml（OD600=0.8-1.2）

∷ LPS產(chǎn)率高，且重復(fù)性好（見Fig.1）；

∷ 提取LPS下游應(yīng)用廣，包括直接用于免疫刺激；

操作步驟：

1）室溫離心收獲細(xì)菌細(xì)胞，13，000rpm，30sec。

2）加入1ml裂解緩沖液（Lysis Buffer），劇烈渦旋混勻。

3）加入200μl氯方，劇烈渦旋混勻10-20 sec，室溫孵育5min。

4）4℃，13,000rpm離心10min，轉(zhuǎn)移400μl上清到新1.5ml離心管中。

5）加入800μl純化裂解液（Purification Buffer），并混勻。-20℃孵育10min。

6）4℃，13,000rpm離心15min。

7）用1ml 70%EtOH洗滌LPS顆粒，并*干燥。

8）在LPS中加入70μl Tris-HCL（10mM，pH8.0），并超聲。



技術(shù)數(shù)據(jù)

LPS提取率

 

應(yīng)變

LPS收率（μg）蛋白質(zhì)污染*
鼠傷寒沙門氏菌200 ~ 400< 0.2微克
腸炎鏈球菌90 ~ 250< 0.2微克
S. gallinarum （沙氏菌）150 ~ 450< 0.2微克
大腸桿菌（野生型）220 ~ 490< 0.2微克
大腸桿菌 （O：055）260 ~ 510< 0.2微克
大腸桿菌 （O：111）220 ~ 500< 0.2微克
大腸桿菌 （O：1）180 ~ 380< 0.2微克
大腸桿菌 （O：2）180 ~ 380

< 0.2微克

 

5 使用LPS提取試劑盒從OD600的每個(gè)G（-）菌株中提取LPS后，使用Purpald測(cè)定法對(duì)提取的LPS進(jìn)行定量，結(jié)果證實(shí)了上述提取效率。另一方面，使用我們的 SMART? Micro BCA 檢測(cè)試劑盒觀察到蛋白質(zhì)的存在，并確認(rèn)污染小于 0.2 μg。

 

從不同菌株中提取的LPS的條帶模式

 

 

泳道 1 ： 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 2 ： 腸炎
鏈球菌 泳道 3 ： 大腸桿菌 （O055） 泳道 4 ： 大腸桿菌 （O111） 泳道 5 ： 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 6 ： 腸炎
鏈球菌 泳道 7 ： 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 8 ： 大腸桿菌 （野生tyoe） 泳道 9 ： 大腸桿菌 （O111） 泳道 10 ： 大腸桿菌 （O2）

 

由于從各種類型的革蘭氏陰性細(xì)菌中提取的LPS的SDS-PAGE后銀染色，根據(jù)作為多聚體存在的LPS的特征和多聚體的數(shù)量，觀察到階梯形式的條帶模式。據(jù)觀察，模式存在差異。


產(chǎn)品檢測(cè)數(shù)據(jù)圖片：



引文列表：

 

 

1Vaccine
Volume 36, Issue 29, 5 July 2018, Pages 4153-4156		Immunization with lipopolysaccharide-free outer membrane complexes protects against Acinetobacter baumannii infectionMarina R. Pulido a, Meritxell García-Quintanilla a, Jerónimo Pachón a, b, Michael J. McConnell Spain
2bioRxiv,  2023Understanding the Mechanisms of Salmonella Typhimurium resistance to CannabidiolIddrisu Ibrahim,  View ORCID ProfileJoseph Atia Ayariga, Junhuan Xu, Daniel A. Abugri, Robertson K. Boakai, Olufemi S. AjayiUSA
3Biosensors 2022, 12, 153. https://doi.org/10.3390/bios12030153 https://www.mdpi.com/journal/biosensorsA Novel Peptide as a Specific and Selective Probe for Klebsiella pneumoniae DetectionHyun Kim, Ju Hye Jang , Young Jung, Ju Hyun ChoKorea
4Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 5442. https://doi.org/10.3390/ijms23105442 https://www.mdpi.com/journal/ijmsPrunetinoside Inhibits Lipopolysaccharide-Provoked Inflammatory Response via Suppressing NF-κB and Activating the JNK-Mediated Signaling Pathway in RAW264.7 Macrophage CellsAbuyaseer Abusaliya, Pritam Bhagwan Bhosale, Hun Hwan Kim, Sang Eun Ha, Min Yeong Park, Se Hyo Jeong , Preethi Vetrivel, Joon-Suk Park, Gon Sup Kim Korea
5Journal of Oral Biosciences
Available online 2 June 2022		Green tea catechins inhibit Porphyromonas gulae LPS-induced inflammatory responses in human gingival epithelial cellsShoYoshida, HiroakiInaba, RyotaNomura, Kazuhiko Nakano, Michiyo Matsumoto-NakanoJapan