Blasticidin S (10 mg/ml) 殺稻瘟菌素S (滅瘟素)(10 mg/ml)
目錄號 | NA0531-1ML | ||||||||||||||||||||||||||
規(guī)格 | 1ml | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | ||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | Blasticidin S Hydrochloride 滅瘟素S鹽酸鹽;稻瘟散; | 保存溫度 | -20℃保存 | ||||||||||||||||||||||||
CAS號 | 3513-03-9 | 有效期 | 2年 | ||||||||||||||||||||||||
應(yīng)用 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選抗生素 | ||||||||||||||||||||||||||
產(chǎn)品簡介: Blasticidin S (10 mg/ml) 殺稻瘟菌素S(滅瘟素)(10 mg/ml)
產(chǎn)品標(biāo)簽 Blasticidin 殺稻瘟菌素;10mg/ml;bls 乙酰轉(zhuǎn)移酶基因;bsr或BSD 脫氨酶基因;遺傳霉素G418;Hygromycin B 潮霉素B;CAS:3513-03-9
產(chǎn)品描述 Blasticidin S(殺稻瘟菌素),也稱為滅瘟素S鹽酸鹽,稻瘟散,從灰色鏈霉菌Streptomyces griseochromogenes分離到的一種核苷肽類抗生素。主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成。殺稻瘟菌素S用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素S具有快速而強效的作用模式,一個星期內(nèi)完成陽性克隆的篩選,且很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。
本品為溶于HEPES buffer,pH 7.5的無菌溶液,濃度為10mg/ml。用于細(xì)菌篩選的常用濃度為25-100μg/ml,用于哺乳動物細(xì)胞篩選的常用濃度為1-50μg/ml,初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。
產(chǎn)品特性 1)同義名:Blasticidin S Hydrochloride滅瘟素S鹽酸鹽;稻瘟散; 2)CAS NO.:3513-03-9 3)分子式:C17H26N8O5·HCl 4)分子量:458.9 5)純度:>95%(HPLC) 6)化學(xué)結(jié)構(gòu)式:
保存與運輸方法 保存:-20℃保存,2年有效,避免反復(fù)凍融。 運輸:冰袋運輸。
使用濃度 1)大腸桿菌(E. coli)(常用濃度:25-100μg/ml) E. Coli對Blasticidin S敏感性很弱,但含Blasticidin S抗性的轉(zhuǎn)化子可在低鹽LB固體培養(yǎng)基(pH 8.0),100μg/ml Blasticidin S的條件下進(jìn)行篩選。高pH可增強抗生素篩選活性。
2)哺乳動物細(xì)胞(常用濃度:1-50μg/ml) 哺乳動物細(xì)胞系BlasticidinS的常用工作濃度范圍1-50 μg/ml。初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。 一些哺乳動物細(xì)胞的建議工作濃度:
操作步驟 Blasticidin S常用濃度范圍1-50 μg/ml,以10 μg/ml為多,初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。攜帶bsr或BSD基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞后,用含有Blasticidin S的正常生長培養(yǎng)基來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆。 1)轉(zhuǎn)染48h后,用含適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代;【注】:細(xì)胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細(xì)胞密度太高,抗生素效率降低。分盤時覆蓋率最好不超過25%。 2)每3-4天去除舊培養(yǎng)基,加入含相同濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基; 3)7天后評估細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率,集落形成可能需要再增加一周或更久。 4)轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆到35mm細(xì)胞培養(yǎng)盤,加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測。
注意事項 1)Blasticidin S為有毒化合物,操作時需注意防護(hù),切勿與身體或皮膚直接接觸。 2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 |