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0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)（NBS0461）

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0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)（NBS0461）

0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)
貨號：NBS0461
規(guī)格：10ml
品牌：NoninBio
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0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)

 

0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)

貨號：NBS0461

規(guī)格：10ml

品牌：NoninBio


TCEP-HCl的化學(xué)結(jié)構(gòu)式








產(chǎn)品簡介：

TCEP即TCEP-HCl，全稱Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride，中文名為三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。分子式為C9H15O6P·HCl，分子量為286.65，CAS號51805-45-9。本產(chǎn)品為0.5M TCEP溶液，用NaOH調(diào)節(jié)pH值至6.8，常作為DTT的替代物用于蛋白上樣緩沖液和其它還原試劑的配制。在SDS-PAGE電泳中，一般終濃度在25mM左右的TCEP即可足夠還原蛋白樣品。TCEP使用范圍廣泛，無論是普通的SDS-PAGE中蛋白的還原，還是一些特殊的實驗如固相金屬離子親和層析(IMAC)、質(zhì)譜、Ni柱純化等其它需要還原二硫鍵的實驗，也特別適用于組氨酸標(biāo)記蛋白純化、馬來酰亞胺偶聯(lián)半胱氨酸殘基反應(yīng)，它能夠預(yù)防半胱氨酸殘基形成二硫鍵，但不像DTT或β-巰基乙醇本身易與馬來酰亞胺反應(yīng)。

 

保存條件：

-20℃或4℃保存，至少1年有效。


注意事項：

1.      本產(chǎn)品用于蛋白變性時，建議95℃水浴或PCR儀加熱5分鐘，溫度過高(如100℃)或時間過長(如超過15分鐘)，有可能會導(dǎo)致蛋白降解或上樣緩沖液中指示劑的顏色異常。

2.      本產(chǎn)品在磷酸鹽緩沖液中，尤其在中性或堿性磷酸鹽緩沖液中很不穩(wěn)定。因此若實驗過程需將本產(chǎn)品配制在PBS緩沖液中使用，必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.      大多數(shù)蛋白無需變性劑即可高效還原，但加入鹽酸胍等變性劑有助于將內(nèi)部二硫鍵暴露而易于和TCEP發(fā)生反應(yīng)。

4.      不建議使用尿素作為變性劑，避免形成氰酸酯并與巰基反應(yīng)。

5.      盡量防止金屬接觸TCEP溶液，否則會一定程度降低TCEP活性。在還原過程中向樣品緩沖液中加入5至20mM EDTA有助于防止巰基被二價金屬離子氧化，如Zn2+、Cu2+和Mg2+等。

6.      還原后樣品應(yīng)盡快使用，長時間放置后會重新生成二硫化物。

7.      本產(chǎn)品在溶液中帶電荷，因此不適用于等電聚焦(IEF)實驗。

8.      TCEP對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

9.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

產(chǎn)品使用：

1.      在不含DTT或β-ME的2×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(100mM Tris，20%甘油，4% SDS，0.005%溴酚藍(lán)，pH6.8)中加入本產(chǎn)品， 至TCEP終濃度為50mM，吹打或斡旋混勻。

2.      將等體積的上述2×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液與蛋白提取液加入到新的離心管中并混勻，沸水浴中煮5min。

3.      樣品冷卻后，在離心機(jī)中瞬離，然后取上層溶液進(jìn)行Western blot實驗。