DiI (DiIC18(3))細(xì)胞膜橙紅色熒光探針

產(chǎn)品描述

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類長(zhǎng)鏈的親脂性二烷基碳菁類染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)。作為一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱）結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，于最佳濃度條件下可將整個(gè)細(xì)胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC濾光器檢測(cè)，可結(jié)合使用。其中，DiI及其衍生物由于極其低的細(xì)胞毒性，應(yīng)用最為廣泛。不僅普遍用于活體和固定組織及細(xì)胞的神經(jīng)元逆行性和順行性示蹤分析，還可以用于檢測(cè)細(xì)胞的融合和粘附，檢測(cè)發(fā)育或移植過(guò)程的細(xì)胞遷移，通過(guò)FRAP（熒光光漂白恢復(fù)技術(shù)）檢測(cè)脂質(zhì)在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散過(guò)程，檢測(cè)細(xì)胞毒性，以及標(biāo)記脂蛋白如LDL和HDL等。

DiI (DiIC18(3)) 是一種親脂性膜染料，通常用作神經(jīng)元和其它細(xì)胞的長(zhǎng)期示蹤劑。DiI 在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，僅當(dāng)進(jìn)入到細(xì)胞膜后才可以被激發(fā)出很強(qiáng)的橙紅色熒光 (λex=549 nm，λem=565 nm)。

DiI基本特性：

1)      別名：DiI perchlorate; DiIC18(3)

2)      CAS NO：41085-99-8

3)      分子式：C59H97ClN2O4

4)      分子量：933.87 g/mol

5)      純度：≥99%（TLC）

6)      溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

7)      外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末

8)      Ex/Em：549/565 nm（in phosphate buffer/SDS pH 7.0）

9)      推薦濾光器：Omega- XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

保存與運(yùn)輸方法

保存：粉末：-20oC避光保存，有效期3年；

          溶劑中：-80°C避光保存，有效期1年。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

溶液配制表

DMSO

使用方法

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)條件做出調(diào)整。

1.染色液制備

1）儲(chǔ)存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲(chǔ)存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87 g/mol）溶于1.07ml無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲(chǔ)存液?！咀⒁狻?未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，調(diào)整到1～5μM的工作濃度。【注意】工作液最終濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度開(kāi)始，以10倍范圍為區(qū)間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2.懸浮細(xì)胞染色

1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5）再重復(fù)3），4）步驟兩次。

3.貼壁細(xì)胞染色

1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內(nèi)。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

4）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。

4、顯微鏡檢測(cè)

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見(jiàn)下表：

2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞分別用流式細(xì)胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1）熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。