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iFluor 647標記的小麥胚芽凝集素（WGA）（NBS5559）

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iFluor 647標記的小麥胚芽凝集素（WGA）（NBS5559）

iFluor 647標記的小麥胚芽凝集素（WGA），iFluor 647 Conjugate Wheat Germ Agglutinin
貨號：NBS5559
規(guī)格：1mg
品牌：NoninBio
促銷： ￥1398.00
價格： ￥1748.00
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NBS5559-1mg

iFluor 647標記的小麥胚芽凝集素（WGA），iFluor 647 Conjugate Wheat Germ Agglutinin

貨號：NBS5559

規(guī)格：1mg

品牌：NoninBio

產品參數

Ex (nm)656Em (nm)670
分子量N/A溶劑Water
存儲條件在零下15度以下保存, 避免光照

產品基本信息

產品名稱：iFluor 647標記的小麥胚芽凝集素（WGA），iFluor 647 Conjugate Wheat Germ Agglutinin

儲存條件：-15℃避光防潮

保質期：12個月


麥胚凝集素（WGA）是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素。它是目前研究多、應用廣泛的一類凝集素。由于WGA與糖綴合物結合，其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織，用于熒光成像和分析。WGA的糖結合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列，即幾丁質酶有關。每個單體包含兩個相同的非相互作用的結合位點，它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補。在所檢測的單糖中，只有GlcNAc與WGA結合。甘露聚糖不結合，而GalNAc只能弱結合。WGA與含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重復序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的內部GlcNAc殘基具有高親和力結合。N-乙酰神經氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA顯示了復雜的糖類特異性模式，可用于復雜碳水化合物的結構分析。iFluor 647小麥胚芽凝集素（WGA）綴合物可能是亮的WGA綴合物。它表現出了iFluor的明亮和綠色熒光。iFluor 647小麥胚芽凝集素（WGA）綴合物與唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖殘基結合，跟Alexa Fluor 647 WGA結合物一樣。

熒光顯微鏡
激發(fā)：Cy5濾波片
發(fā)射：Cy5濾波片
推薦孔板：黑色透明


實驗方案

樣品分析方案

溶液配制

儲備溶液配制 

iFluor 647 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲備液 (200X)

將 500 μL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲備溶液。 注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲存，或在 -20 °C 下長期儲存。

工作溶液配制 

iFluor 647-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)

將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
注意：不同細胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。 活細胞的推薦起始濃度為 5-10 μg/mL。

 

操作步驟

1.活細胞染色
1.1 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.2 添加 100 μL iFluor 647-WGA 工作溶液。
1.3 將細胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。
1.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.5 使用 Cy5 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。

 

2.固定細胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定細胞。
注意：對于固定細胞膜染色，建議在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導致細胞內區(qū)室染色，如高爾基體和內質網 (ER) 結構染色。
2.2 添加 100 μL iFluor 647-WGA 工作溶液。
2.3 在室溫下用 WGA 工作溶液孵育細胞 10-30 分鐘。
2.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
2.5 使用 Cy5 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。

 

圖示

圖 1. 使用 iFluor 647-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物以 5 μg/mL的濃度在活細胞（Hela細胞） 染色 30 分鐘，然后用 Hoechst 33342 染色。使用帶Cy5和DAPI濾波片組的熒光顯微鏡成像。