5-Ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) 5-乙炔基-2’-脫氧尿苷

貨號(hào)：NBS4211-50MG，NBS4211-250MG

品牌：NoninBio

產(chǎn)品描述

EdU，英文全稱5-Ethynyl-2'-deoxyuridine，中文全稱5-乙炔基-2’-脫氧尿苷，是BrdU（5-溴-2’-脫氧尿苷）的新型替代物，可直接檢測(cè)活躍的DNA合成或細(xì)胞周期的S期合成。作為胸苷的核苷類似物，可插入細(xì)胞培養(yǎng)物或動(dòng)物體內(nèi)處于活躍合成期的細(xì)胞DNA，無(wú)明顯毒性。EdU的檢測(cè)基于高效的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)（click reaction），是由I價(jià)銅離子催化的疊氮化物和炔烴化合物之間的反應(yīng)過(guò)程。EdU含有炔烴基，可與含疊氮基團(tuán)的熒光探針反應(yīng)形成穩(wěn)定的三唑環(huán)。

借EdU的點(diǎn)擊反應(yīng)進(jìn)行DNA檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)是非常顯而易見的。含疊氮基團(tuán)熒光探針的小分子量使得EdU能在溫和條件插入DNA，這相反于BrdU為基礎(chǔ)的反應(yīng)，后者需要DNA變性（通常使用HCl，加熱或DNase消化）促使BrdU暴露，從而被抗BrdU抗體檢測(cè)到。因此，少了變性步驟的EdU反應(yīng)流程快鍵方便，可得到高重復(fù)性的結(jié)果，并且能輕易的與相關(guān)抗體檢測(cè)靶標(biāo)包括磷酸化H3、Ki67、周期蛋白cyclin B1等進(jìn)行多重分析，通過(guò)流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或高通量成像儀（HCS）來(lái)檢測(cè)。

產(chǎn)品特性

1）CAS NO：61135-33-9

2）同義名：2'-deoxy-5-ethynyl-uridine2’-脫氧-5-乙炔基-尿苷, 2'-deoxy-5-Ethynyluridine, 5-EdU,EdU

3）分子式：C11H12N2O5

4）分子量：252.23 g/mol

5）純度：≥98% (HPLC)

6）外觀：白色至類白色固體

7）溶解性：溶于DMSO（20mg/ml），無(wú)水乙醇（~25mg/ml），PBS, pH 7.2（~10 mg/ml）

8）化學(xué)結(jié)構(gòu)：

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20°C干燥保存，至少2年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

常見問(wèn)題（FAQs）

1. 是否任何細(xì)胞型都能插入EdU？

答：不是。細(xì)胞必須含嘧啶核苷酸補(bǔ)救合成途徑（pyrimidine salvage pathway），沒有該途徑，EdU不能被磷酸化進(jìn)而不能插入復(fù)制中的DNA。

2. EdU儲(chǔ)存液如何制備？

答：體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，取適量EdU（Mw：252.23）溶于DMSO或生理緩沖液配制10mM母液，按單次用量分裝，置于≤-20°C凍存，1年穩(wěn)定。

3. 如何進(jìn)行EdU標(biāo)記？

起始實(shí)驗(yàn)建議測(cè)試一系列EdU濃度來(lái)確定最佳濃度。如果目前有進(jìn)行基于BrdU的標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，可選擇相似的濃度和標(biāo)記時(shí)間作為起始EdU標(biāo)記條件。更低量的EdU可能達(dá)到同BrdU的標(biāo)記效果，最優(yōu)濃度根據(jù)標(biāo)記時(shí)間有所變化，原則上濃度越低，標(biāo)記時(shí)間越長(zhǎng)。

對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)物——哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞用0.1–10 μM EdU孵育0.5-3h能達(dá)到相對(duì)理想的標(biāo)記；

對(duì)于活體動(dòng)物——根據(jù)注射方式、給藥次數(shù)和檢測(cè)位置有所變化。參考相應(yīng)文獻(xiàn)進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。

4. 如何進(jìn)行EdU檢測(cè)？

使用含疊氮基團(tuán)的熒光探針如TAMRA azide，Alexa Fluor azide（包括Alexa fluor 488, 555, 594, 647）等，在含有CuSO4的染色反應(yīng)液中進(jìn)行熒光染色?；蛘咧苯邮褂梦宜咎峁┑?strong>EdU增殖檢測(cè)試劑盒（成像或流式檢測(cè)），含有所有檢測(cè)組分，使用方便。

注意事項(xiàng)

1）EdU是一種能插入DNA的核苷類似物，操作過(guò)程一定要注意防護(hù)，不要與皮膚直接接觸。另需戴口罩避免粉塵吸入。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。