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intronbio 脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide(LPS)Extraction Kit(17141 )

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intronbio 脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide(LPS)Extraction Kit(17141 )

脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide(LPS)Extraction Kit
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脂多糖提取試劑盒 Lipopolysaccharide(LPS)Extraction Kit

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品牌:intronbio 

試劑盒組成

組分

名稱

規(guī)格

保存方法

1

Lysis Buffer

1x 100 ml

2~8

2

Purification Buffer

1x 80ml

2~8

LPS背景描述

 ◆ 脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的主要成分,結構很復雜、熱穩(wěn)定性*(在250℃下干熱滅菌2h才*滅活)。受LPS發(fā)現的歷史原因,如今LPS的概念幾乎等同于內毒素(endotoxin)。LPS由多糖鏈和脂質A組成,不同細菌間的多糖鏈是高度變化的,決定細菌的血清型;而脂質A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級聯(lián)反應和機體的毒性病理生理活動,包括釋放內毒素引起感染性休克從而導致末梢血管虛脫。臨床常通過檢測LPS的存在來診斷腦膜炎。

◆ 正是LPS與機體免疫機能的密切關系,生命科學研究常常提取LPS進行相關的研究,如闡明LPS的結構,代謝,免疫學,生理學,毒性,生物合成途徑;誘導生長促進因子如白介素的合成與分泌;誘導疾病研究的動物模型如炎癥反應,急性肺損傷,

產品描述:

◆ 常用的LPS提取方法仍然是Westphal,O. (1965)使用的熱酚-水法(hot phenol-water method),主要優(yōu)勢在于高產量,但是提取步驟繁瑣,費時,以及常受蛋白質和核酸的污染,純度低等缺點也常困擾科研工作者。

◆ iNtRON提供的LPS提取試劑盒是市場上的個商品化的產品,排除傳統(tǒng)熱酚-水法的缺陷,使得科研工作者能夠快速方便的從細菌中提取LPS

產品優(yōu)勢:

 適用性廣,能從所有G-菌中提取LPS(見Fig. 2);

 操作時間短(包括裂解在內,60min內即可完成);操作簡單方便;

 少量細菌即可獲得足夠的LPS;LPS產量與細菌培養(yǎng)物成正比,一般使用3~5ml培養(yǎng)物LPS產量高;細菌適合培養(yǎng)體積1~2ml(OD600=0.8-1.2)

 LPS產率高,且重復性好(見Fig.1);

 提取LPS下游應用廣,包括直接用于免疫刺激;

操作步驟:

1)室溫離心收獲細菌細胞,13,000rpm,30sec。

2)加入1ml裂解緩沖液(Lysis Buffer),劇烈渦旋混勻。

3)加入200μl氯方,劇烈渦旋混勻10-20 sec,室溫孵育5min。

4)4℃,13,000rpm離心10min,轉移400μl上清到新1.5ml離心管中。

5)加入800μl純化裂解液(Purification Buffer),并混勻。-20℃孵育10min。

6)4℃,13,000rpm離心15min。

7)用1ml 70%EtOH洗滌LPS顆粒,并*干燥。

8)在LPS中加入70μl Tris-HCL(10mM,pH8.0),并超聲。



技術數據

LPS提取率

 

應變

LPS收率(μg)蛋白質污染*
鼠傷寒沙門氏菌200 ~ 400< 0.2微克
腸炎鏈球菌90 ~ 250< 0.2微克
S. gallinarum (沙氏菌)150 ~ 450< 0.2微克
大腸桿菌(野生型)220 ~ 490< 0.2微克
大腸桿菌 (O:055)260 ~ 510< 0.2微克
大腸桿菌 (O:111)220 ~ 500< 0.2微克
大腸桿菌 (O:1)180 ~ 380< 0.2微克
大腸桿菌 (O:2)180 ~ 380

< 0.2微克

 

5 使用LPS提取試劑盒從OD600的每個G(-)菌株中提取LPS后,使用Purpald測定法對提取的LPS進行定量,結果證實了上述提取效率。另一方面,使用我們的 SMART? Micro BCA 檢測試劑盒觀察到蛋白質的存在,并確認污染小于 0.2 μg。

 

從不同菌株中提取的LPS的條帶模式

 

 

泳道 1 : 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 2 : 腸炎
鏈球菌 泳道 3 : 大腸桿菌 (O055) 泳道 4 : 大腸桿菌 (O111) 泳道 5 : 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 6 : 腸炎
鏈球菌 泳道 7 : 鼠傷寒沙門氏菌 泳道 8 : 大腸桿菌 (野生tyoe) 泳道 9 : 大腸桿菌 (O111) 泳道 10 : 大腸桿菌 (O2)

 

由于從各種類型的革蘭氏陰性細菌中提取的LPS的SDS-PAGE后銀染色,根據作為多聚體存在的LPS的特征和多聚體的數量,觀察到階梯形式的條帶模式。據觀察,模式存在差異。


產品檢測數據圖片:



引文列表:

 

 

1Vaccine
Volume 36, Issue 29, 5 July 2018, Pages 4153-4156
Immunization with lipopolysaccharide-free outer membrane complexes protects against Acinetobacter baumannii infectionMarina R. Pulido a, Meritxell García-Quintanilla a, Jerónimo Pachón a, b, Michael J. McConnell Spain
2bioRxiv,  2023Understanding the Mechanisms of Salmonella Typhimurium resistance to CannabidiolIddrisu Ibrahim,  View ORCID ProfileJoseph Atia Ayariga, Junhuan Xu, Daniel A. Abugri, Robertson K. Boakai, Olufemi S. AjayiUSA
3Biosensors 2022, 12, 153. https://doi.org/10.3390/bios12030153 https://www.mdpi.com/journal/biosensorsA Novel Peptide as a Specific and Selective Probe for Klebsiella pneumoniae DetectionHyun Kim, Ju Hye Jang , Young Jung, Ju Hyun ChoKorea
4Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 5442. https://doi.org/10.3390/ijms23105442 https://www.mdpi.com/journal/ijmsPrunetinoside Inhibits Lipopolysaccharide-Provoked Inflammatory Response via Suppressing NF-κB and Activating the JNK-Mediated Signaling Pathway in RAW264.7 Macrophage CellsAbuyaseer Abusaliya, Pritam Bhagwan Bhosale, Hun Hwan Kim, Sang Eun Ha, Min Yeong Park, Se Hyo Jeong , Preethi Vetrivel, Joon-Suk Park, Gon Sup Kim Korea
5Journal of Oral Biosciences
Available online 2 June 2022
Green tea catechins inhibit Porphyromonas gulae LPS-induced inflammatory responses in human gingival epithelial cellsShoYoshida, HiroakiInaba, RyotaNomura, Kazuhiko Nakano, Michiyo Matsumoto-NakanoJapan