Mag-520 AM, Cell Permeant 鎂離子熒光探針

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶，強(qiáng)烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)（貨號(hào)：NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

目前，市場(chǎng)上所有的鎂離子熒光探針（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），都是源于廣受歡迎的四羧酸BAPTA鈣離子螯合劑改造的三羧酸APTRA螯合劑，這類螯合劑對(duì)鈣離子（Ca²⁺）的親和性高于鎂離子（Mg²⁺），通常在鎂離子濃度測(cè)定的過(guò)程中造成一定的干擾：①鈣離子和鎂離子誘導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)通常是纏連在一起，弱選擇性的鎂離子探針會(huì)檢測(cè)到鈣離子誘導(dǎo)信號(hào)產(chǎn)生的錯(cuò)誤結(jié)果；②生理刺激下的鎂離子濃度變化往往不如鈣離子顯著；因此，靈敏度和選擇性更高的鎂離子熒光探針被期待開(kāi)發(fā)。 

Mag-520正是彌補(bǔ)現(xiàn)有鎂離子探針的缺陷而開(kāi)發(fā)的一款新型熒光探針，能夠檢測(cè)濃度在0.1~10mM范圍內(nèi)的Mg²⁺。與現(xiàn)有的熒光探針比如Mag-Fluo-4相比，對(duì)Mg²⁺的親和力比Ca²⁺高10倍。Mag-520能夠用常用的488nm氬激發(fā)器來(lái)激發(fā)，發(fā)射波長(zhǎng)是525±20nm（比如：FITC濾片設(shè)置），幾乎與所有常見(jiàn)的熒光測(cè)定儀器兼容（見(jiàn)附錄Fig 1. Mag-520的光譜和選擇性）。

Mag-520 AM是Mag-520的一種乙酰甲酯衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，只需簡(jiǎn)單培養(yǎng)，即可輕易進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的Mag-520，從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。體外研究表明，多種細(xì)胞系（比如：HL-60）經(jīng)佛司可林（Forskolin）和FCCP/CCCP刺激產(chǎn)生的胞內(nèi)Mg²⁺變化能即刻被Mag-520 AM檢測(cè)到。

核心優(yōu)勢(shì)（選擇性更高的鎂離子探針，發(fā)綠色熒光，用標(biāo)準(zhǔn)FITC濾片設(shè)置或通道檢測(cè)即可）

Mag-520是傳統(tǒng)鎂離子探針（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），具有更高的鎂離子特異性，與現(xiàn)有的熒光探針比如Mag-Fluo-4相比，對(duì)Mg²⁺的親和力比Ca²⁺高10倍（見(jiàn)下圖）。傳統(tǒng)的鎂離子探針雖然開(kāi)發(fā)用來(lái)檢測(cè)鎂離子，但受結(jié)構(gòu)的限制性，對(duì)Ca²⁺的親和性高于Mg²⁺。

Fig 1. Mag-520的光譜特征和選擇性。A）Mag-520（10μM）在不同Mg²⁺濃度（0-100mM）下的熒光發(fā)射光譜。光譜在50mM HEPES buffer, pH 7.7的體系內(nèi)測(cè)定。B）在含Mg²⁺和Ca²⁺（濃度范圍：0.005~300mM）的體系內(nèi)分別用Mag-520和Mag-Fluo-4在發(fā)射波長(zhǎng)525nm（激發(fā)：490nm）下測(cè)定的熒光強(qiáng)度。

產(chǎn)品特性：

1） 同義名：Mag-520 acetoxymethyl ester

2） 分子量：579.46 g/mol

3） 外觀：固體

4） 純度：≥90%（HPLC）

5） Ex/Em：506/525 nm

6） 溶解性：溶于DMSO

保存條件: 

-20oC干燥避光保存，至少一年有效。

產(chǎn)品使用：

1. 儲(chǔ)存液制備

取一管低溫保存的Mag-520 AM，置于室溫回溫至少20min。之后加入高質(zhì)量無(wú)水DMSO配制成2~5mM儲(chǔ)存液，比如50μg Mag-520 AM（Mw：579.46 g/mol）溶于17μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM儲(chǔ)存液。

【注意】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融，且要避光保存。盡快使用完（不要超過(guò)3個(gè)月）。

2. 工作液制備

用合適的生理緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋適量Mag-520 AM母液到工作濃度，常用的2-10μM，具體的請(qǐng)根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)需求來(lái)優(yōu)化。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

3. 操作步驟

【注意】以下使用方法僅作參考，需根據(jù)具體的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)要求做出調(diào)整。

3.1 按需培養(yǎng)細(xì)胞。

3.2 用合適的生理緩沖液比如：DPBS，清洗細(xì)胞。

3.3 加入適量的染色工作液覆蓋細(xì)胞，于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育15~45min。加載時(shí)間和濃度需根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)要求來(lái)調(diào)整。

3.4 吸走染色工作液，用合適的生理緩沖液比如：DPBS，清洗細(xì)胞。

3.5 用合適的生理緩沖液重懸細(xì)胞。

3.6 加入刺激劑處理細(xì)胞，之后監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度變化，用流式細(xì)胞儀（530/30nm濾片，FITC通道）或帶FITC濾片設(shè)置的熒光顯微鏡。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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