Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) 羥苯基熒光素

產品信息

產品描述

氨基苯基熒光素（APF）和羥苯基熒光素（HPF）是由T. Nagano開發(fā)的兩種活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示劑，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更優(yōu)秀的特異性和穩(wěn)定性。APF和HPF顯示有限的非選擇性反應，和相對較高的光誘導氧化抗性。APF和HPF具細胞膜滲透性，本身無熒光，直到與羥基自由基或過氧亞硝基陰離子反應，還能與次氯酸陰離子反應，產生強綠色熒光（Ex/Em，~490/515nm），可用熒光顯微鏡、高通量成像儀、熒光酶標板或流式細胞儀檢測。

本品以粉末形式提供，可直接溶于DMF配制成5mM儲存液，常用工作濃度范圍1-10μM，需根據(jù)自身的實驗體系或參考文獻進行優(yōu)化。

產品特性

1）CAS NO.：359010-69-8

2）同義名：3'-p-(hydroxyphenyl) fluorescein (HPF)羥苯基熒光素

3）分子式：C26H16O6

4）分子量：424.4

5）純度：≥95%

6）Ex/Em：492/515nm

7）溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）

保存與運輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，至少一年有效。

運輸：冰袋運輸。 

使用方法

一、儲存液制備

將低溫保存的1mg粉末置于室溫回溫至少20min，之后加入471μl 無水DMF配置成5mM儲存液。充分溶解和混勻后，按照單次用量分裝，-20oC避光干燥保存，避免反復凍融。

【注】：HPF能溶于DMSO（10mM），但有數(shù)據(jù)顯示DMSO是羥基自由基的淬滅劑，會干擾檢測和降低靈敏性。因此，建議用DMF作為溶劑。

【注】：與DMSO相比，DMF的細胞毒性相對較高，建議用戶在使用過程中，在達到理想熒光信號的前提下使用最低濃度的探針。如果待檢細胞在培養(yǎng)的過程中就發(fā)現(xiàn)比較敏感（或不好培養(yǎng)），建議在使用HPF之前，先做一組溶劑對照組來觀察細胞對DMF的敏感程度。

二、溶液體系檢測

正式實驗前，取一管HPF儲存液置于室溫回溫，使其充分融解。之后用合適的緩沖液（比如HHBS緩沖液，PBS緩沖液）稀釋到所需的工作濃度。建議起始濃度為1-10μM，需根據(jù)自身的實驗體系或參考文獻進行優(yōu)化。

三、細胞體系檢測

以下實驗步驟僅做參考，最佳的工作濃度、孵育時間和溫度需根據(jù)實際情況進行調整。在加入HPF工作液之前按需處理細胞。

1）根據(jù)具體用量，將DMF儲存液用HHBS緩沖液或其他生理緩沖液稀釋成1-10μM工作液。

2）根據(jù)實驗設計處理細胞（比如，RASM細胞用50-100nM 血管緊張素II處理3-5h）。

3）取步驟1）準備的1-10μM工作液加入細胞，37oC孵育20-60min。

4）吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理緩沖液替換。

5）用合適的熒光儀器（Ex/Em=492/515nm）來檢測。

【注1】：BSA和酚紅會影響熒光，需謹慎使用。

【注2】：HPF和APF能用于溶液體系或胞內ROS檢測。

注意事項

1）APF和HPF僅用于科研研究，不可用于體外診斷研究。

2）APF和HPF產生的熒光相對于其他活性氧探針比如DCFH弱很多，這是探針本身的特性決定的（見附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物質的反應特異性）。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物質的反應特異性

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