腫瘤動物模型的建立

將對數(shù)生長的腫瘤細(xì)胞收集, 用無血清基質(zhì) 10.0ml, 于 1500 轉(zhuǎn)/分, 離心3min, 連續(xù)洗 3 次, 最后用無血清基質(zhì)混勻, 用血球計數(shù)器計算腫瘤細(xì)胞數(shù)量(平均 5 個中方格的細(xì)胞計數(shù)×1000444即是腫瘤數(shù)/毫升)。 計算完腫瘤細(xì)胞總數(shù), 再將腫瘤細(xì)胞密度調(diào)至 4×106 個/ml, 每只小鼠腋下接種 50ul(即 2×105 個腫瘤細(xì)胞), 2周左右可捫及腫瘤小節(jié)結(jié)。一般選取 6—8 周的小鼠，不同的腫瘤細(xì)胞接種的數(shù)量和動物不一樣, 比如 LL/2, B16, Hep? 可接種 C57 和 BALB/C 小鼠, NS-1, EL-4, C26, Meth A 可接種 BALB/C 小鼠, H22 接種昆明鼠。從腫瘤接種后可捫及小結(jié)節(jié)開始, 每 3 天用游標(biāo)卡尺量腫瘤縱橫大小(單位: mm), 至少連續(xù)一個月時間。注意要設(shè)計不同的實(shí)驗組和對照組, 每組動物數(shù)一般為 5—10 只, 一般接種腫瘤6—8 周后，小鼠的腫瘤可生長至直徑為 15—20mm (即小鼠會瀕臨死亡)時, 可眼球取血，分離血清并保存血清, 處死小鼠, 取腫瘤組織照相, 取部分腫瘤組織作冰凍組織切片(或-80℃ 保存), 作相應(yīng)的免疫組織化學(xué)染色 , 取部分腫瘤組織用3%中性的甲醛固定, 石臘包埋, 作常規(guī) HE 染色.

小鼠尾靜脈注射方法

在靠近實(shí)驗臺邊緣處, 用大培養(yǎng)皿扣住小鼠, 左手抓住小鼠尾巴, 用酒精棉球擦尾巴, 可見到兩側(cè)靜脈; 注射前應(yīng)確認(rèn)針管內(nèi)無氣泡, 注射時由尾尖開始,順向刺入。失敗后再逐漸移向根部重刺, 若準(zhǔn)確刺入靜脈內(nèi), 推進(jìn)時無阻力, 一般可注入 0.1—0.5ml。

腫瘤蛋白疫苗預(yù)防性動物實(shí)驗

一般腫瘤蛋白疫苗首次免疫劑量 10ug/只小鼠, 與相應(yīng)佐劑混勻, 在背部皮下注射, 第 2 次免疫間隔 2 周, 同樣加佐劑在皮下注射；第 3 次免疫間隔 2 周, 同樣加佐劑在皮下注射；第3 次免疫后 2 周, 用 ELISA 檢測其血清效價，當(dāng)效價達(dá)到要求時；在接種腫瘤細(xì)胞前 3 天,于腹腔或尾靜脈加強(qiáng)注射 20ug /只。