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CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑(NBS1157)

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CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑(NBS1157)

CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑
貨號:NBS1157
規(guī)格:5ml(500T);10ml(2x500T);
50ml(10x500T);100ml(20x500T)
品牌:NoninBio
價格: 398.00~5680.00
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5ml(500T) 10ml(2x500T) 50ml(10x500T) 100ml(20x500T)

CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑

貨號:NBS1157

規(guī)格:5ml(500T);10ml(2x500T);

50ml(10x500T);100ml(20x500T)

品牌:NoninBio

產(chǎn)品簡介

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞活性檢測試劑盒是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性相關(guān)實驗的快速、高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8 的主要成分為水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),Water Soluble Tetrazolium-8 是一種類似于 MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(Formazan,參考圖 1)。Water Soluble Tetrazolium-8 被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中?;罴毎臄?shù)目越多,則顏色越深。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

     

  

   圖 1. Water Soluble Tetrazolium-8 分子結(jié)構(gòu)及 CCK-8 檢測原理
產(chǎn)品特點
本試劑盒提供了一種靈敏度高、操作簡便、使用安全的細胞增殖與活性檢測方法。與傳統(tǒng)的 MTT 法相比具有明顯的優(yōu)勢:
(1)MTT法生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解;而 CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,省去了溶解步驟,因此減少了該操作步驟帶來的實驗誤差。(2)由于CCK-8產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,無需吸掉培養(yǎng)基后,再用 DMSO 等有機溶劑溶解,非常適合用于懸浮細胞的活性測定。
(3)與MTT方法相比,CCK-8 法線性范圍更寬,靈敏度更高。
(4)CCK-8法對細胞無毒性,可以多次測定,選取最佳測定時間。
(5)CCK-8法無需配制,即開即用。
(6)CCK-8法適合大規(guī)模、高通量的樣品檢測。
儲存條件

本試劑盒在在-20℃至少可以保存 3 年,4℃保存1年,避免反復凍融。
本產(chǎn)品經(jīng)測試:5 次左右的反復凍融,對產(chǎn)品質(zhì)量幾乎沒有任何影響。

使用方法
(1)在 96孔板中配制100 μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng) 24 小時(在 37℃,5% CO2 的條件下)。
(2)向培養(yǎng)板加入10μL 的待測藥物進行處理。
(3)根據(jù)實驗需要,將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段時間(例如:6, 12,24 或 48 小時)。
【注】:如果不進行藥物處理而直接測定細胞的活性,則不需要 2-3 步驟,直接從第 4 步操作。
(4)向每孔加入10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數(shù))。
(5)將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 2-4 小時。用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。如果暫時不測定 OD 值,可以向每孔中加入 10 μL 1% SDS(w/v)溶液或者 0.1 M HCl 溶液,并蓋上培養(yǎng)板蓋子,在室溫條件下避光保存。24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

    

圖2: CCK8  檢驗報告

 

注意事項
1)由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā),周圍一圈建議不用,改加PBS或水。
2)CCK-8檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。如果待測體系中存在還原劑(例如一些抗氧化劑),可能會干擾檢測結(jié)果,需設法去除其影響。
3)當使用標準96孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為 1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基),且加入CCK-8 后孵育的時間長一些。
4)如果細胞培養(yǎng)時間較長,培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化,應洗滌細胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。
5)酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除只含有培養(yǎng)基的對照孔中本底的吸光度而消除,因此不會對檢測結(jié)果造成影響。