DH5α感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品簡介

本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA，-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實(shí)驗(yàn)的成本。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。

基因型：F-，φ80lacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169， recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品特點(diǎn)

DH5α菌株一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

保存條件

低溫運(yùn)輸，-70℃凍存。

操作方法（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）---------------------------------------------------------

1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨募?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。

一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。

以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3 將離心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3分鐘，該過程不要搖動(dòng)離心管。

4 向每個(gè)離心管中加入500 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1小時(shí)（160 - 220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取 200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板。）

注意事項(xiàng)----------------------------------------------------------------------------------------------------------

1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過長，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。

3. 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最低。